o principal diferença entre a fase normal e a cromatografia de fase reversa é que a cromatografia de fase normal possui uma fase estacionária muito polar e uma fase móvel apolar, enquanto a cromatografia de fase reversa possui uma fase estacionária apolar e uma fase móvel polar. Além disso, a fase estacionária da cromatografia de fase normal é principalmente sílica pura, e a fase móvel é um solvente não aquoso, como o clorofórmio, enquanto a fase estacionária da cromatografia de fase reversa é um substrato de sílica modificado com longas cadeias hidrofóbicas longas e o móvel fase é principalmente água, metanol ou acetonitrila.

A cromatografia de fase normal e reversa são dois tipos de métodos de HPLC (cromatografia líquida de alta eficiência) que operam sob alta pressão. Geralmente, eles têm um poder de resolução maior quando comparados à cromatografia líquida normal.

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O que é cromatografia de fase normal

A cromatografia de fase normal é um tipo de técnica de HPLC. Ele separa os analitos com base no grau de interação com o absorvente, que é a sílica polar. Portanto, a fase estacionária deste tipo de cromatografia é hidrofílica. Ele também pode fazer interações hidrofílicas com as moléculas hidrofílicas na mistura da amostra. Geralmente, essas interações incluem ligações de hidrogênio, interações dipolo-dipolo, etc. Portanto, mais analitos apolares permanecem mais tempo na fase estacionária, aumentando o tempo de retenção.

Figura 1: Cromatografia de fase normal e fase reversa - Propriedades

Além disso, a fase móvel na cromatografia de fase normal é apolar e não aquosa. Portanto, analitos não polares ou hidrofóbicos na mistura são eliminados efetivamente com a fase móvel no início do processo. Enquanto isso, o tempo de retenção dos analitos diminui com o aumento da polaridade da fase móvel. Além disso, a baixa reprodutibilidade do tempo de retenção é a principal desvantagem da cromatografia de fase normal. Basicamente, isso ocorre devido à presença de uma camada de água ou de solventes orgânicos próticos na superfície da sílica. No entanto, isso é eliminado na cromatografia de fase reversa.

O que é cromatografia de fase reversa

A cromatografia de fase reversa é um tipo de HPLC recente. Apresenta maior reprodutibilidade do tempo de retenção quando comparado à cromatografia de fase normal. Basicamente, esse aumento da reprodutibilidade é obtido tornando a fase estacionária apolar. Para fazer isso, a superfície da fase estacionária de sílica é modificada como RMe2SiCl, onde R é um grupo alquil de cadeia linear, como C18H37 ou C8H17. No entanto, devido à natureza não polar da fase estacionária, analitos menos polares na mistura da amostra tendem a ter um tempo de retenção maior em contraste com a cromatografia de fase normal.

Figura 2: Cromatografia de fase reversa - eluição

Semelhanças entre cromatografia de fase normal e fase reversa

Diferença entre cromatografia de fase normal e fase reversa

Definição

A cromatografia de fase normal refere-se a um método de separação que permite a distribuição de componentes de uma mistura entre duas fases, uma das quais é uma fase estacionária polar, enquanto a fase móvel é apolar. Em contraste, a cromatografia de fase reversa refere-se ao método de separação, cuja fase móvel é mais polar do que a fase estacionária.

Evolução

A cromatografia de fase normal foi desenvolvida na década de 1970 na forma de cromatografia líquida. Mas, a cromatografia de fase reversa é uma forma recentemente desenvolvida de HPLC.

Fase Estacionária

Além disso, a cromatografia de fase normal usa uma fase estacionária polar, que é principalmente sílica pura, enquanto a cromatografia de fase reversa usa uma fase estacionária apolar, que é um substrato de sílica modificado com longas cadeias hidrofóbicas longas.

Na fase móvel

A cromatografia de fase normal usa um solvente não polar não aquoso como a fase móvel, que é principalmente clorofórmio, enquanto a cromatografia de fase reversa usa uma fase móvel polar, que é principalmente água, metanol ou acetonitrila.

Tipos de Separação

Analitos na fase móvel

Na cromatografia de fase normal, a fase móvel carrega analitos não polares no início da separação, enquanto na cromatografia de fase reversa, a fase móvel carrega analitos polares.

Aumentando o tempo de retenção

Uma fase móvel apolar aumenta o tempo de retenção da cromatografia de fase normal, enquanto uma fase móvel polar aumenta o tempo de retenção da cromatografia de fase reversa.

Eluição

Os analitos podem ser eluídos aumentando a polaridade da fase móvel na cromatografia de fase normal, enquanto os analitos podem ser eluídos diminuindo a polaridade da fase móvel na cromatografia de fase reversa.

Características da fase estacionária

A fase estacionária da cromatografia de fase normal contém uma camada de água ou solvente orgânico prótico, enquanto a fase estacionária da cromatografia de fase reversa não contém água ou uma camada de solvente prótico.

Reprodutibilidade do tempo de retenção

Danos à coluna

A coluna da cromatografia de fase normal é fácil de danificar, enquanto a coluna da cromatografia de fase reversa é difícil de danificar.

Conclusão

A cromatografia de fase normal é um tipo de HPLC que usa uma fase estacionária polar e uma fase móvel apolar. Como resultado disso, analitos apolares da mistura movem-se para fora da coluna facilmente, permitindo a separação de analitos polares com base no grau de interação com o absorvente da fase estacionária. Por outro lado, a cromatografia de fase reversa é um tipo de HPLC recente, que usa uma fase estacionária apolar e uma fase móvel polar. Portanto, analitos polares movem-se para fora da coluna junto com a fase móvel, permitindo a separação de analitos apolares com base no grau de interação com a fase estacionária. Portanto, a principal diferença entre a cromatografia de fase normal e reversa é o tipo de fase estacionária e fase móvel.

Referências:

1. “Modos de separação de HPLC”. Águas, disponíveis aqui.

Cortesia de imagem:

1. “HILIC Uses and Benefits” de Chem461S16Group4 - Trabalho próprio (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia 2. “Esquemático de eluição de gradiente de fase reversa” por Nategm - Trabalho próprio (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia