o principal diferença entre GFP e EGFP é que o GFP (significa Proteína Fluorescente Verde) é uma proteína que exibe fluorescência verde brilhante quando exposta à luz azul, enquanto a EGFP (significa Proteína de Fluorescência Verde Avançada) exibe fluorescência mais forte do que GFP. Além disso, uma outra diferença importante entre GFP e EGFP é que a GFP é uma proteína de tipo selvagem isolada da água-viva, Aequorea victoria. Mas, EGFP é uma variante projetada do tipo selvagem original.

GFP e EGFP são dois tipos de proteínas que atuam como cromóforos internos. Eles não requerem nenhuma enzima / substrato acessório, cofator ou produtos genéticos para exibir sua cor. Portanto, ambos são usados ​​como repórteres da expressão gênica em biologia molecular.

Cromóforo, EGFP, GFP, Green Fluorescence, Wild-Type Protein

O que é GFP

GFP (proteína fluorescente verde) é uma proteína que brilha em verde sob luz azul ou UV. Ocorre naturalmente na água-viva, Aequorea Victoria. A GFP é composta por 238 aminoácidos. O tamanho do GFP é 26,9 kDa. GFP é uma ferramenta poderosa em biologia molecular devido à sua fluorescência intrínseca sem qualquer molécula acessória. A fluorescência se deve ao rearranjo covalente dos aminoácidos contíguos da proteína. Após o dobramento da proteína, os átomos da cadeia principal, Ser65, Tyr66 e Gly67 formam o cromóforo p-hidroxibenzilideneimidazolinona planar altamente conjugado na presença de O₂. Os estudos da estrutura cristalina revelam que o empacotamento do cromóforo dentro do núcleo da estrutura do barril β da molécula o protege de extinção por meio de oxigênio paramagnético, dipolos de água ou isomerização cis-trans. Além disso, as interações não covalentes do cromóforo com as moléculas vizinhas aumentam suas propriedades espectrais.

Figura 1: Representação da fita de GFP e fluoróforo

A GFP pode ser introduzida em um organismo durante as modificações transgênicas. Ele também pode ser mantido por gerações. A principal desvantagem da GFP de tipo selvagem é a eficácia reduzida da proteína na imagem celular causada pelo dobramento de baixa eficiência em temperaturas fisiológicas como 37 ° C, diminuindo o sinal fluorescente. Além disso, a taxa de maturação de GFP dentro da célula hospedeira é lenta enquanto tende a agregar. Dois picos de excitação podem ser observados devido à presença de duas formas diferentes do cromóforo. No entanto, a engenharia de proteínas resolveu a maioria dos problemas, introduzindo formas variantes da GFP de tipo selvagem.

O que é EGFP

EGFP (proteína de fluorescência verde aprimorada) é uma variante da GFP de tipo selvagem com emissão de maior intensidade em relação à GFP. É uma das primeiras e mais importantes variantes de GFP. As duas mutações, F64L e S65T, geram EGFP com uma maior eficiência de dobramento a 37 ° C. Curiosamente, EGFP tem um único pico de excitação em ~ 490 nm devido à supressão do pico de 395 nm por S65T, uma vez que modula o estado ionizado de Glu222 nas proximidades. Por outro lado, F64L aumenta a eficiência de dobramento a 37 ° C. É importante ressaltar que a sequência de códons de EGFP é otimizada para a expressão nas células de mamíferos.

Figura 2: Expressão EGFP

Semelhanças entre GFP e EGFP

Diferença entre GFP e EGFP

Definição

GFP: Uma proteína de tipo selvagem que exibe fluorescência verde sob luz azul ou UV e ocorre naturalmente na água-viva, Aequorea Victoria

EGFP: Uma variante do GFP de tipo selvagem com emissão de maior intensidade em relação ao GFP

Apoia

GFP: Proteína de fluorescência verde

EGFP: Proteína de fluorescência verde aprimorada

Origem

GFP: Tipo selvagem

EGFP: Mutante

64^º Aminoácido

GFP: Fenilalanina

EGFP: Leucina

65^º Aminoácido

GFP: Serine

EGFP: Treonina

Brilho da cor

GFP: Verde claro

EGFP: Verde brilhante

Picos de Excitação

GFP: Dois picos (395 nm e 490 nm)

EGFP: Pico único (490 nm)

Eficiência de dobramento a 37 ° C

GFP: Baixo

EGFP: Alto

Conclusão

GFP é a proteína de tipo selvagem que exibe fluorescência verde brilhante quando exposta à luz azul ou UV. EGFP é uma variante de GFP que exibe fluorescência de maior intensidade em comparação com GFP. Assim, a principal diferença entre GFP e EGFP é a intensidade da fluorescência verde que cada proteína emite.

Referência:

1. Arpino, James A. J., et al. "Crystal Structure of Enhanced Green Fluorescent Protein to 1.35 Å Resolution Reveals Alternative Conformations for Glu222." PLOS Medicine, Public Library of Science, journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.

Cortesia de imagem:

1. “Gfp and fluorophore” Por Raymond Keller (Raymond Keller (falar)), sob os auspícios da Crystal Protein. - Trabalho próprio (Domínio Público) via Commons Wikimedia 2. “Fgams ppat egfp puncta” Por Zhao A, Tsechansky M, Swaminathan J, Cook L, Ellington AD, et al. (2013) Transiently Transfected Purine Biosynthetic Enzymes Form Stress Bodies. PLoS ONE 8 (2): e56203. doi: 10.1371 / journal.pone.0056203 (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia