o principal diferença entre a eletroforese em gel e SDS PAGE é que eletroforese em gel é uma técnica usada para separar DNA, RNA e proteínas, enquanto SDS PAGE é um tipo de eletroforese em gel usado principalmente para separar proteínas. Geralmente, SDS PAGE fornece uma resolução melhor do que a eletroforese em gel regular.

Eletroforese em Gel e SDS PAGE são técnicas em biotecnologia que auxiliam na separação de macromoléculas com base na carga e tamanho. Normalmente, a eletroforese em gel usa stabs de gel de agarose para a separação, enquanto o SDS PAGE usa stabs de gel de poliacrilamida.

Principais áreas cobertas

1. O que é eletroforese em gel - Definição, Procedimento, Importância 2. O que é SDS PAGE - Definição, Procedimento, Importância 3. Quais são as semelhanças entre eletroforese em gel e SDS PAGE - Esboço de características comuns 4. Qual é a diferença entre eletroforese em gel e SDS PAGE - Comparação das principais diferenças

Termos-chave: Agarose, DNA, Eletroforese em Gel, Poliacrilamida, Proteínas, SDS PAGE

O que é eletroforese em gel

Eletroforese em gel é uma técnica que separa fragmentos de macromoléculas como DNA, RNA e proteínas com base em seu tamanho e carga. Durante a eletroforese em gel, as macromoléculas se movem sob a influência de um campo elétrico em uma matriz de gel, que contém poros através dos quais as macromoléculas se movem. Eletroforese em gel é a técnica geral que analisa DNA a partir de técnicas de PCR, RFLP, clonagem, sequenciamento de DNA ou blotting. As nanopartículas também podem ser separadas por eletroforese em gel. O gel stab é preparado a partir de um polissacarídeo chamado agarose, derivado de algas marinhas. Os géis de agarose consistem em moléculas de agarose de cadeia longa interligadas como uma teia de aranha. O vídeo 1 descreve a preparação de um gel de agarose.

Tanto o DNA quanto o RNA contêm grupos fosfato em cada um de seus nucleotídeos monômeros. Conseqüentemente, eles possuem carga negativa igual em toda a molécula. Além disso, eles migram em direção ao eletrodo positivo sob o campo elétrico. A velocidade de migração depende do tamanho do ácido nucléico. Moléculas menores migram mais rápido através dos poros, enquanto as maiores levam algum tempo.

Figura 1: Bandas de DNA em um gel de agarose

O que é SDS PAGE

SDS PAGE (eletroforese em gel de dodecil sulfato de sódio-poliacrilamida) é uma técnica analítica usada para separar moléculas carregadas com base no tamanho. Neste processo, o SDS é usado para isolar proteínas desnaturando-as. Como SDS é um detergente; a estrutura terciária das proteínas é interrompida por ele, transformando a proteína dobrada em uma molécula linear. Além disso, ele reveste essa molécula de proteína linear com uma carga negativa uniforme. O SDS PAGE consiste em dois géis com diferentes concentrações. A camada superior é chamada de gel de empilhamento no qual as amostras são carregadas, enquanto a camada inferior é chamada de gel de resolução. A concentração de poliacrilamida do gel de empilhamento é 3,5-4% (tamanho de poro grande) e concentra proteínas em uma banda. A concentração de poliacrilamida no gel de resolução é de 4-20% (tamanho de poro pequeno) e separa as proteínas com base em seu tamanho. O vídeo 2 mostra a preparação de uma SDS PAGE.

O SDS PAGE fornece uma separação rápida de proteínas, auxiliando na análise subsequente, como o Western blotting.

Figura 2: Bandas de proteína em SDS PAGE

Uma vez que o poder de resolução de SDS PAGE é maior do que um gel de agarose regular, SDS PAGE ajuda a separar pequenos fragmentos de DNA com 5-500 bp de tamanho.

Semelhanças entre eletroforese em gel e SDS PAGE

Diferença entre eletroforese em gel e SDS PAGE

Definição

Eletroforese em Gel: Técnica usada para separar fragmentos de macromoléculas, como DNA, RNA e proteínas com base em seu tamanho e carga

PÁGINA SDS: Uma técnica analítica usada para separar moléculas carregadas com base no tamanho

Composição

Eletroforese em Gel: Igual em todo o gel; feito de agarose

PÁGINA SDS: Dois géis com diferentes concentrações; feito de poliacrilamida

Configuração de execução

Eletroforese em Gel: Corrida horizontal

PÁGINA SDS: Corrida vertical

Metodologia de Fundição

Eletroforese em Gel: Define enquanto esfria

PÁGINA SDS: Conjuntos por uma reação química

Tamanho de Poro

Eletroforese em Gel: O tamanho dos poros não é uniforme; quanto maior a concentração de agarose, menor o tamanho do poro

PÁGINA SDS: O tamanho dos poros é uniforme; a proporção de acrilamida para bis-acrilamida determina o tamanho do poro

Concentração

Eletroforese em Gel: 0.5-2%

PÁGINA SDS: 6-15%

Separação

Eletroforese em Gel: Ácidos nucleicos de 50-20.000 pb

PÁGINA SDS: 5-250.000 proteínas Da

Condições

Eletroforese em Gel: Geralmente executado em condições nativas

PÁGINA SDS: Condições de desnaturação

Preparação

Eletroforese em Gel: Simples

PÁGINA SDS: Um processo complexo

Coloração

Eletroforese em Gel: Com brometo de etídio

PÁGINA SDS: Coloração de Coomassie ou coloração de prata

Conclusão

A eletroforese em gel é uma técnica analítica que separa macromoléculas como DNA, RNA e proteínas com base em seu tamanho. SDS PAGE é um tipo de eletroforese em gel usado principalmente para separar proteínas em condições desnaturantes. O SDS PAGE tem um poder de resolução superior quando comparado com a eletroforese em gel normal. A principal diferença entre a eletroforese em gel e SDS PAGE é o tipo de macromoléculas separadas e seu procedimento.

Referência:

1. “Eletroforese em Gel”. Khan Academy, disponível aqui2. “Eletroforese em Gel de Poliacrilamida SDS (SDS-PAGE).” Instituto Diamantina, 26 de abril de 2017, disponível aqui

Cortesia de imagem:

1. “Eletroforese em gel 2” Von Mnolf - Foto tirada em Innsbruck, Áustria (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia 2. “Coomassie3” Por Yikrazuul - Trabalho próprio (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia