o principal diferença entre a hibridização de colônia e placa é que o a hibridização de colônias é o método usado na seleção de colônias bacterianas com os genes desejados, enquanto a hibridização em placa é o método de seleção de fagos com os genes desejados. Além disso, a hibridização de colônia pode ser usada na triagem de bibliotecas baseadas em plasmídeo ou cosmídeo, enquanto a hibridização em placa pode ser usada na triagem de bibliotecas de fago.

A hibridização de colônias e placas são duas técnicas usadas na triagem de bibliotecas genômicas ou de cDNA. Eles também são chamados elevador de colônia e elevador de placa respectivamente.

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O que é hibridização de colônia

A hibridização de colônias é um método de triagem usado na seleção de colônias bacterianas com uma sequência de DNA desejada. Também é chamado hibridização de transferência de colônia, elevação de colônia ou replica de placas. Permite a triagem de colônias plaqueadas com alta densidade. O procedimento original de hibridização de colônia foi desenvolvido pela primeira vez por Grunstein e Hogness. Primeiro, as colônias bacterianas podem ser transformadas em uma membrana e as colônias bacterianas são lisadas, expondo os ácidos nucléicos. Em seguida, os ácidos nucléicos expostos são fixados na membrana desnaturando-os e são hibridizados com as sondas radioativas.

Figura 1: Método de hibridização de colônia

Uma colônia é um agrupamento de bactérias desenvolvido a partir de uma única célula bacteriana por meio da reprodução assexuada. Conseqüentemente, todas as células bacterianas em uma colônia específica possuem a mesma composição genética, bem como o material genético transformado. Geralmente, as bactérias são transformadas com o auxílio de vetores de plasmídeo ou cosmídeo.

O que é Hibridização de Placa

A hibridização em placa é o método de triagem para fagos recombinantes. É uma modificação da hibridização de colônia por Benton e Devis em 1977. O método também é denominado elevador de placa. O procedimento de hibridização de placa é semelhante ao procedimento de hibridização de colônia e as placas são levantadas por contato com uma membrana de nitrocelulose. Os ácidos nucléicos são então expostos e fixados na membrana, hibridizando com as sondas desejadas.

Figura 2: Placas em uma placa de ágar

Uma placa é uma zona clara em uma placa de ágar produzida por um bacteriófago específico pela lise de células bacterianas naquela área. Devido à menor quantidade de DNA transferido para a membrana de nitrocelulose, a hibridização de placa produz menos sinais de fundo.

Semelhanças entre hibridização de colônia e placa

Diferença entre hibridização de colônia e placa

Definição

A hibridização de colônias se refere a um método de seleção de colônias bacterianas com os genes desejados, enquanto a hibridização de placas se refere a um método de triagem usado na identificação de fagos recombinantes.

Desenvolvido por

A hibridização de colônia foi desenvolvida pela primeira vez por Grunstein e Hogness, enquanto a hibridização de placa foi desenvolvida pela primeira vez por Benton e Devis em 1977.

Tipos de Bibliotecas

A hibridização de colônia envolve a identificação de bibliotecas baseadas em plasmídeo ou cosmídeo, enquanto a hibridização em placa envolve a identificação de bibliotecas de fago.

Número de elevadores

As colônias podem ser levantadas uma única vez, enquanto as placas podem ser levantadas várias vezes.

Sinais de fundo

Conclusão

A hibridização de colônias é um método de triagem de colônias bacterianas nas bibliotecas produzidas com vetores de plasmídeo ou cosmídeo. Por outro lado, a hibridização em placa é um método de triagem de bacteriófagos nas bibliotecas de fagos. A principal diferença entre hibridização de colônia e placa é o tipo de biblioteca rastreada em cada método.

Referência:

1. Kaksonen, Anna. “Abordagens moleculares para análise de comunidade microbiana.” Lixiviação - BioMineWiki, 20 de abril de 2006, disponível aqui2. Dale, J W e P J Greenaway. “Identificação de Fagos Recombinantes por Hibridização de Placa.” Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.)., U.S. National Library of Medicine, disponível aqui

Cortesia de imagem:

1. “Blot Hybridization” por Kaksonen - http://wiki.biomine.skelleftea.se/biomine/molecular/index_22.htm (domínio público) via Commons Wikimedia 2. “M. placa smegmatis ”Por Wazzzup7up - Própria obra (Domínio Público) via Commons Wikimedia