Um processo de coloração diferencial é usado na coloração de endosporos. O verde malaquita é a mancha primária que mancha tanto as células vegetativas quanto os endosporos dentro da amostra. Então, o uso de calor ajuda a penetrar a mancha primária até o endosporo. Após a descoloração, a safranina contracolorante é usada para manchar o fundo.

Dois gêneros patogênicos conhecidos como Bacillus e Clostridium produzem endosporos metabolicamente inativos para resistir a condições ambientais adversas. Uma vez que os endosporos causam várias doenças letais, a sua identificação é muito importante em amostras clínicas.

Principais áreas cobertas

1. O que são endosporos - Definição, Fatos 2. O que é coloração de endosporo - Técnicas de coloração de endosporo 3. Por que o calor é usado na coloração de endosporo - Uso de Calor

Termos-chave: Endosporos, Calor, Verde Malaquita, Poros, Células Vegetativas

O que são endosporos

Um endosporo é uma estrutura resistente produzida por alguns gêneros de bactérias patogênicas, como Bacillus e Clostridium, para sobreviver em condições ambientais desfavoráveis. Essas condições desfavoráveis ​​podem ser calor, dessecação, radiação ou produtos químicos. O processo de produção de endosporos a partir de células vegetativas é denominado esporulação. O processo pode demorar de 8 a 10 horas. Os endosporos podem residir dentro da célula bacteriana ou podem existir como esporos livres. A formação de endosporos é mostrada na figura 1.

Figura 1: Formação de endosporos

Os endosporos são metabolicamente inativos ou dormentes. Eles contêm uma pequena quantidade de citoplasma e DNA coberto por uma cobertura externa protetora. A parede celular consiste em ácido dipicolínico, conferindo ao endosporo propriedades resistentes ao calor. Os endosporos germinam para produzir novos organismos quando as condições ambientais se tornam favoráveis. O tratamento de calor úmido a 121 ° C por 15 minutos pode destruir os endosporos bacterianos.

O que é coloração de endosporo

A coloração do endosporo é um processo diferencial de coloração em que diferentes estruturas da amostra são tingidas em cores diferentes. Permite a identificação de endosporos de células vegetativas. O processo de coloração de endosporo padrão é a técnica de Schaeffer-Dulton. A mancha primária nesta técnica é verde malaquita e a contracoloração é safranina.

Técnica de Schaeffer-Dulton - Procedimento

1. Após esfregar em uma lâmina de microscópio, deixe a amostra bacteriana saturar com a solução de verde malaquita. Em seguida, aqueça suavemente a lâmina por 3-5 minutos até que a tinta comece a evaporar.3. Deixe a lâmina esfriar e lave-a com água para descoloração. Finalmente, após a contracoloração, enxágue a lâmina.5. Seque a lâmina ao ar e observe ao microscópio.

Aqui, os endosporos são corados em verde com verde malaquita e as células vegetativas são coradas em rosa com safranina. Os endosporos corados pela técnica de Schaeffer-Dulton são mostrados na figura 2.

Figura 2: Endosporos (verde) e células vgetativas (rosa)

Uma técnica alternativa de coloração de endosporos pode ser identificada, conhecida como método de Doner. Os endosporos serão tingidos de vermelho neste método.

Por que o calor é usado na coloração de endosporos

A cobertura de queratina dos endosporos resiste às manchas. Portanto, a mancha primária deve ser forçada para o endosporo. O uso de calor é para aumentar a penetração da mancha primária no endosporo. A lâmina com verde malaquita pode ser aquecida até 3-5 minutos. O tempo de aquecimento é diretamente proporcional à quantidade de corantes penetrados na parede dos endosporos. Tempos de aquecimento mais longos formam poros na parede do endosporo, facilitando a penetração de mais corantes.

Conclusão

Os endosporos são as células reprodutivas da maioria das bactérias patogênicas. Portanto, a identificação de endosporos em uma amostra é crítica no diagnóstico.

Referência:

1. “Mancha de endosporo - Compreendendo as definições, técnicas e procedimentos.” MicroscopeMaster, disponível aqui.

Cortesia de imagem:

1. “Endospore Formation” de Farah, Sophia, Alex - Trabalho do próprio (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia2. “Bacillus subtilis Spore” de Y tambe (uploader original) - Trabalho do próprio (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia