o principal diferença entre a citometria de fluxo e FACS é que a citometria de fluxo permite a coleta rápida, precisa e simples de dados relacionados a muitos parâmetros de uma mistura heterogênea de fluidos contendo células vivas. Mas, FACS (classificação de células ativadas por fluorescência) é um derivado da citometria de fluxo que permite classificar fisicamente uma mistura heterogênea de células em diferentes populações. Além disso, a citometria de fluxo usa as propriedades de dispersão de luz diferencial das células para coletar dados, enquanto o FACS usa anticorpos altamente específicos marcados com corantes fluorescentes para diferenciar entre os tipos de células. Além disso, a citometria de fluxo usa um sensor para adquirir dados, mas o FACS usa um eletroímã para classificar a amostra.

Em resumo, a citometria de fluxo e FACS são duas técnicas em biologia celular analítica usadas para criar perfis de células em uma mistura heterogênea. Geralmente, a citometria de fluxo envolve a análise de células e medição da expressão de proteínas como uma técnica de análise adicional de FACS, que envolve a separação de células em uma população mista.

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O que é citometria de fluxo

A citometria de fluxo é uma técnica analítica de biologia celular, que permite determinar diferentes parâmetros de células vivas em uma mistura heterogênea. Além disso, o primeiro dispositivo de citometria de fluxo baseado em impedância foi inventado por Wallace H. Coulter em 1953. Normalmente, diferentes parâmetros medidos por citometria de fluxo incluem;

Processo

Além disso, a suspensão da amostra com vários tipos de células em fluido permite o escoamento pelo citômetro de fluxo. Dentro do qual, as células fluem idealmente uma célula por vez através de um feixe de laser. Aqui, os tipos de células mostram características diferenciais de espalhamento de luz exclusivas para os tipos de células. Normalmente, isso pode ser devido à expressão diferencial de proteínas, conteúdo de ácido nucleico, componentes intracelulares ou componentes da superfície celular.

Figura 1: Citometria de fluxo

Análise

Além disso, na citometria de fluxo, diferentes tipos de padrões de espalhamento de luz e padrões de emissão de fluorescência envolvem a análise de tipos de células. Eles incluem luz dispersa direta e dispersa lateralmente, emissão de fluorescência e análise multiparamétrica. Destes, a luz dispersa para a frente refrata da célula, continuando ao longo do mesmo caminho através do qual viaja originalmente. Além disso, ajuda a detectar o tamanho da célula. Enquanto isso, a luz espalhada lateralmente refrata das células em uma direção que está fora do caminho da luz original. Assim, ele determina a granularidade e a complexidade de diferentes tipos de células.

Além disso, após excitação pelo comprimento de onda compatível do laser, as moléculas fluorescentes das células emitem luz fluorescente, auxiliando na identificação de diferentes estruturas das células. Além disso, corantes fluorescentes ou anticorpos marcados com fluorescência também podem ser usados ​​para marcar estruturas específicas das células. Além disso, a luz dispersa frontal vs lateral é traçada a partir das populações de leucócitos, auxiliando na identificação específica de granulócitos e linfócitos.

O que é FACS

FACS (classificação de células ativadas por fluorescência) é um tipo modificado de citometria de fluxo. A principal característica do FACS é sua capacidade de separar fisicamente cada tipo de célula na mistura heterogênea. Para isso, esta técnica usa anticorpos específicos do alvo marcados com fluorescência para identificar um tipo de célula particular na mistura. Portanto, FACS separa a mistura de células heterogêneas em mais dois tipos de células. Além disso, o FACS foi inventado por Len Herzenberg, que posteriormente ganhou o Prêmio Kyoto em 2006 por seu trabalho seminal.

Figura 2: FACS

Importância

Processo

Normalmente, no FACS, a amostra flui através de um bico vibratório, que transforma o fluxo em gotículas, idealmente contendo uma célula. Em seguida, essas gotículas percorrem um anel de carga elétrica, que classifica fisicamente os tipos de células com base em sua carga.

Semelhanças entre citometria de fluxo e FACS

Diferença entre citometria de fluxo e FACS

Definição

A citometria de fluxo se refere à análise de material biológico por meio da detecção das propriedades de absorção de luz ou fluorescência de células ou frações subcelulares, como cromossomos, à medida que passam em um fluxo estreito através de um feixe de laser. Enquanto isso, FACS (classificação de células ativadas por fluorescência) se refere a um tipo especializado de citometria de fluxo, fornecendo um método para classificar uma mistura heterogênea de células biológicas em dois ou mais recipientes, uma célula por vez, com base na dispersão de luz específica e fluorescente características de cada célula.

Correspondência

A citometria de fluxo é uma técnica analítica de biologia celular, enquanto FACS é um tipo especializado de citometria de fluxo.

Consequência

A citometria de fluxo segue FACS, enquanto FACS é a primeira etapa da análise de uma mistura heterogênea de células.

Significado

A citometria de fluxo envolve a análise de células e medição da expressão de proteínas como uma técnica de análise adicional de FACS, enquanto FACS envolve a classificação de células em uma população mista.

Função

A citometria de fluxo mede as propriedades das células, como número, tamanho e conteúdo de ácido nucleico das células, enquanto o FACS separa as células em subpopulações de uma mistura heterogênea.

Método de amostragem

A citometria de fluxo usa as propriedades de dispersão de luz diferencial das células para coletar dados, mas o FACS usa anticorpos altamente específicos marcados com corantes fluorescentes para diferenciar entre os tipos de células.

Método de Análise

A citometria de fluxo usa um sensor para adquirir dados, mas o FACS usa um eletroímã para classificar a amostra.

Conclusão

Em resumo, a citometria de fluxo é uma técnica de biologia celular analítica para determinar as características das células em uma mistura heterogênea. Assim, ajuda a determinar o número de células, tamanho e conteúdo de ácido nucleico das células, etc. Além disso, ele usa propriedades de dispersão de luz diferencial de células exclusivas para cada tipo de célula na mistura. Por outro lado, FACS é um tipo de citometria de fluxo que permite a separação de células na mistura heterogênea em dois ou mais tipos. Além disso, ele usa anticorpos marcados com fluorescência para identificar especificamente componentes de diferentes tipos de células. Portanto, FACS é a primeira técnica analítica seguida por citometria de fluxo em ensaios de expressão de proteínas. Portanto, a principal diferença entre a citometria de fluxo e FACS é o método de diferenciação e função celular.

Referências:

1. Robinson, Ryan e Stefan Pellenz. “Ryan Robinson e Stefan Pellenz.” Antibodies, 6 de dezembro de 2013, disponível aqui.2. “Citometria de fluxo (FCM) / FACS | Classificação de células ativadas por fluorescência (FACS). ” Sino Biological, Sino Biological Inc., Disponível aqui.

Cortesia de imagem:

1. “Cytometer” de Kierano - Trabalho próprio (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia 2. “Fluorescence Assisted Cell Sorting (FACS) B” Por SariSabban (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia