o principal diferença entre ELISA e Dot ELISA é que O ELISA auxilia na detecção e quantificação de anticorpos, hormônios, peptídeos ou outras proteínas em uma amostra biológica, enquanto no Dot-ELISA, o substrato cromogênico apenas precipita na área de atividade enzimática. Além disso, os três tipos principais de ELISA são ELISA direto, ELISA indireto e ELISA imunométrico ou sanduíche, enquanto dot-ELISA é um tipo de imunoensaio enzimático em fase sólida, igual ao ELISA comum.

ELISA e dot-ELISA são dois tipos de ferramentas imunológicas usadas para detectar e quantificar a quantidade de proteínas, especialmente antígenos. Eles são ensaios mais rápidos, flexíveis, reproduzíveis, altamente sensíveis e de alto rendimento.

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O que é ELISA

ELISA (ensaio de imunoabsorção enzimática) é um tipo de imunoensaio enzimático em fase sólida responsável pela detecção de proteínas específicas em amostras biológicas com a ajuda de anticorpos primários. Neste teste, uma reação enzimática ajuda a detectar os anticorpos primários ligados. Aqui, a enzima usa um substrato cromogênico para desenvolver uma cor. Além disso, a fase sólida usada pelo ELISA é principalmente uma placa de microtitulação.

Figura 1: Placa de microtitulação

Além disso, existem três tipos principais de ELISA com base na metodologia.

ELISA direto

No ELISA direto, o revestimento da superfície de uma placa com a amostra permite que os anticorpos ligados à enzima se liguem à proteína específica da placa. Então, adicionar o substrato cromogênico ajuda a detectar os anticorpos ligados à proteína.

Figura 2: ELISA direto

ELISA indireto

O ELISA indireto envolve a detecção de uma proteína específica em uma amostra com um processo de ligação em duas etapas. Aqui, a primeira etapa é revestir uma placa com a amostra e incubá-la com um tipo específico de anticorpo primário. Em seguida, a próxima etapa é incubar essa placa com um anticorpo secundário, que se liga ao anticorpo primário. Além disso, este anticorpo secundário tem ligação com uma enzima. Portanto, adicionar o substrato cromogênico ajuda a detectar a proteína específica na placa usando o desenvolvimento da cor.

ELISA imunométrico / sanduíche

No ELISA sanduíche, a primeira etapa é sanduíche a proteína específica a ser detectada na amostra entre o anticorpo primário e o secundário. Aqui, o primeiro processo é revestir a placa com o anticorpo primário, mas não com a amostra. Em seguida, o próximo processo é incubar a amostra com esta placa. Depois disso, a proteína específica ligada ao anticorpo primário pode ser detectada com a ajuda de um anticorpo secundário.

O que é Dot ELISA

Dot-ELISA é um tipo de imunoensaio enzimático em fase sólida. A característica mais significativa do dot-ELISA é a precipitação do substrato cromogênico apenas na área com atividade enzimática. Aqui, a fase sólida é uma membrana de nitrocelulose, que permite a ligação de proteínas à superfície. Após incubar a amostra com a membrana de nitrocelulose, o excesso de amostra é removido por lavagem e a superfície não ligada da membrana de nitrocelulose é bloqueada.

Figura 3: Dot ELISA

Em seguida, o anticorpo primário é adicionado à membrana de nitrocelulose. Finalmente, a adição de um anticorpo secundário ligado a uma enzima auxilia na detecção dos anticorpos secundários ligados à proteína. Assim, isso permite que o complexo proteína-anticorpo apareça como um ponto claro na membrana de nitrocelulose.

Quais são as semelhanças entre ELISA e Dot ELISA

Qual é a diferença entre ELISA e Dot ELISA

Definição

ELISA (ensaio de imunoabsorção enzimática) refere-se a um teste imunoquímico rápido que envolve uma enzima usada para medir uma ampla variedade de testes de fluidos corporais, enquanto dot ELISA se refere a um imunoensaio de fase sólida que pode ser usado para detectar antígeno ou anticorpo. Assim, esta é a principal diferença entre ELISA e dot ELISA.

Tipos

Os três tipos de ELISA são ELISA direto, ELISA indireto e ELISA sanduíche, enquanto dot ELISA é um tipo de ELISA sanduíche.

Método

O ELISA envolve a detecção de uma proteína específica com a ajuda de um anticorpo e a detecção de anticorpos ligados por meio de uma reação enzimática, enquanto no dot ELISA, o substrato cromogênico apenas se liga à área com atividade enzimática. Portanto, esta é outra diferença entre ELISA e dot ELISA.

Fase sólida

Outra diferença entre o ELISA e o dot ELISA é que o ELISA usa principalmente placas de microtitulação como fase sólida, enquanto o dot-ELISA usa membranas de nitrocelulose como fase sólida.

Conclusão

O ELISA é um tipo de ensaio imunológico que envolve a detecção de uma proteína específica em uma amostra biológica com o auxílio de um anticorpo. Aqui, um desenvolvimento de cor por meio de uma reação enzimática está envolvido na detecção dos anticorpos ligados à proteína. Além disso, dot ELISA é um tipo de sanduíche ELISA. Aqui, o substrato cromogênico precipita nas áreas com atividade enzimática. Portanto, a principal diferença entre ELISA e dot ELISA é o método de detecção.

Referência:

1. “TechNote: Quais são as diferenças entre os tipos de ensaio ELISA?” Enzo Life Sciences, 27 de julho de 2018, disponível aqui2. Z, Svobodova. “Teste de afinidade Dot-ELISA: um método fácil e de baixo custo para estimar a atividade de ligação de anticorpos monoclonais.” Journal of Analytical & Bioanalytical Techniques, vol. 04, não. 03, 2013, doi: 10.4172 / 2155-9872.1000168.

Cortesia de imagem:

1. “Microtiter plate” Por Jeffrey M. Vinocur - Própria obra (CC BY 2.5) via Commons Wikimedia 2. “Diagrama ELISA” Por Cavitri - Própria obra (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia 3. “Dot-Elisa” Por MrPotatoDeluxe - Trabalho próprio (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia