o principal diferença entre clonagem e subclonagem é que clonagem é a produção de clones de organismos ou cópias de células ou fragmentos de DNA, enquanto a subclonagem é uma técnica usada para mover uma sequência de DNA particular de um vetor parental para um vetor de destino. Além disso, a clonagem usa cDNA ou gene primário, enquanto a subclonagem envolve a manipulação subsequente do clone por meio da alteração do vetor ou da inserção primária.

A clonagem e a subclonagem são duas técnicas em biologia molecular para manipular os genomas dos organismos através da introdução de fragmentos de DNA de interesse.

Clonagem, vetor de expressão, inserção, vetor pai, subclonagem

O que é clonagem

A clonagem é uma técnica em biologia molecular que ajuda a fazer várias moléculas de um fragmento de DNA de interesse. Portanto, também é conhecido como clonagem molecular. Pode ser usado para amplificar DNA codificador e não codificador, como genes e sequências regulatórias de DNA, incluindo promotores, respectivamente. Além disso, tem uma ampla variedade de aplicações, desde a impressão digital genética até a produção de proteínas em grande escala.

Figura 1: Clonagem Molecular

Além disso, as etapas de clonagem são as seguintes:

1. Fragmentação - quebra de uma fita de DNA por digestão de restrição
2. Ligadura - colagem de pedaços de DNA na sequência desejada
3. Transfecção - inserir os pedaços recém-formados de DNA nas células
4. Triagem / seleção - selecionar as células que foram transfectadas com sucesso com o novo DNA

No entanto, a clonagem também se refere à produção de um grande número de indivíduos geneticamente idênticos de um organismo parental. Pode ocorrer naturalmente no meio ambiente na forma de reprodução. Por outro lado, pode ser realizado dentro do laboratório como nas técnicas de cultura de tecidos.

O que é subclonagem

A subclonagem é uma técnica em biologia molecular que ajuda a mover o DNA inserido do plasmídeo pai para um segundo vetor. Aqui, o segundo vetor pode ser um vetor de expressão, o que permite a expressão do fragmento de DNA. Além disso, pode ser usado para alterar a expressão sob um promotor diferente. Ou então, o segundo vetor pode conter características especiais, como marcador específico para seleção de antibiótico ou expressão fluorescente.

Figura 2: Subclonagem

1. Primeiro, libere e purifique a inserção do vetor original por digestão de restrição
2. Ligue a inserção em um vetor de destino preparado
3. Em seguida, transforme a reação de ligação em células bacterianas competentes
4. Faça a triagem das células transformadas para a inserção

Semelhanças entre clonagem e subclonagem

Diferença entre clonagem e subclonagem

Definição

A clonagem se refere ao processo de criação de clones de organismos ou cópias de células ou fragmentos de DNA, enquanto a subclonagem se refere a uma técnica usada para mover uma sequência de DNA particular de um vetor original para um vetor de destino. Portanto, esta é a principal diferença entre clonagem e subclonagem.

Importância

Tipo de Vetores

Os tipos de vetores são outra diferença entre clonagem e subclonagem. A clonagem geralmente usa vetores de clonagem, enquanto a subclonagem pode usar vetores de expressão.

Conclusão

A clonagem é uma técnica em biologia molecular que ajuda a introduzir um fragmento de DNA de interesse em um organismo hospedeiro ou a construir bibliotecas de DNA, enquanto a subclonagem é outra técnica em biologia molecular que ajuda a introduzir um fragmento de DNA de um vetor pai em outro vetor também. Portanto, esta é a principal diferença entre clonagem e subclonagem.

Referências:

1. “Aplicativos e estratégias comuns de clonagem”. Thermo Fisher Scientific - EUA, disponível aqui.

Cortesia de imagem:

1. “Figura 17 01 06” Por CNX OpenStax (CC BY 4.0) via Commons Wikimedia 2. “Passos de Clonagem Molecular” Por Alexpicardal97 - Trabalho próprio (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia