A eficiência da transfecção pode ser calculada contando o número de células transfectadas sobre o total de células em uma amostra particular. O número de células pode ser contado por dois métodos. O método mais freqüentemente usado é usar repórteres facilmente tratáveis. Esses repórteres podem ser proteína fluorescente verde (GFP), luciferase, beta-galactosidase, fosfatase alcalina secretada (SEAP). O método mais recente para calcular a eficiência da transfecção é rotular os ácidos nucléicos, permitindo rastrear a entrega intracelular deles. Algumas outras abordagens, como Western blotting, imunocoloração e ensaios funcionais também podem ser usados ​​para calcular a eficiência de transfecção. Uma vez que a eficiência da transfecção depende de vários parâmetros experimentais, a determinação da eficiência da transfecção é a chave para determinar a influência de vários fatores na transfecção.

Principais áreas cobertas

1. Quais são os métodos usados ​​para calcular a eficiência da transfecção - Sistemas de Repórter 2. Como calcular a eficiência da transfecção - Contagem de células

Termos-chave: Citometria de fluxo, GFP, Rotulagem de ácido nucléico, Sistema de repórter, Eficiência de transfecção

Quais são os métodos usados ​​para calcular a eficiência da transfecção

Diferentes tipos de métodos são usados ​​para calcular a eficiência da transfecção.

1. Sistemas de repórter

- Proteína fluorescente verde (GFP) - GFP é naturalmente encontrada em medusas. É usado para análise qualitativa e quantitativa de células transfectadas por transfecção simultânea do gene GFP com o gene de interesse. A análise qualitativa pode ser feita em um microscópio de fluorescência. A análise quantitativa pode ser feita por citometria de fluxo. Além de GFP, a proteína de fluorescência vermelha (RFP) e a proteína de fluorescência amarela (YFP) também podem ser usadas como repórteres. As colônias de E. coli que expressam proteínas fluorescentes são mostradas na figura 1.

Figura 1: Proteínas fluorescentes

2. Marcação de ácido nucléico - Os plasmídeos marcados com fluorescência podem ser usados ​​na transfecção. Em seguida, eles podem ser contados em um microscópio de fluorescência.

3. Western blotting, imunocoloração e outros ensaios funcionais

Como calcular a eficiência da transfecção

O número de células que exibem o repórter e o número de células que não exibem o repórter podem ser contados ao microscópio ou por citometria de fluxo. A porcentagem de células que apresentam o repórter dá a eficiência de transfecção.

Figura 2: Eficiência de transfecção

Conclusão

A eficiência da transfecção pode ser calculada determinando o número de células que exibem DNA transfectado sobre o número total de células na amostra. O número de células pode ser calculado sob o microscópio ou por citometria de fluxo usando um sistema repórter.

Referência:

1. “Medir a eficiência da transfecção.” Mirus Bio LLC, disponível aqui.

Cortesia de imagem:

1. “E. coli expressando proteínas fluorescentes ”Por Erin Rod - Trabalho próprio, (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia