A tripsina é uma serina protease que cliva os resíduos de lisina e arginina no terminal C dos peptídeos. É a enzima mais amplamente usada em cultura de células para liberar as células aderentes das superfícies dos recipientes de cultura. A tripsina é facilmente tolerada pela maioria dos tipos de células cultivadas em culturas. Sua atividade pode ser facilmente neutralizada com a adição de soro ao meio de cultura. Essas duas características da tripsina facilitam seu uso em culturas de células. Geralmente, a tripsina é adicionada às culturas de células com EDTA. O papel da tripsina em culturas de células é descrito neste artigo.

Principais áreas cobertas

1. O que é tripsina - Definição, recursos, função 2. Como a tripsina funciona na cultura celular - Papel da tripsina na cultura celular

Termos-chave: Proteínas Adesivas, Adesão Celular, Enzima Digestiva, Tripsina, Tripsinização

O que é tripsina

A tripsina é uma enzima digestiva que decompõe as proteínas do sistema digestivo de muitos vertebrados. Pode ser encontrada no suco pancreático. A tripsina cliva os resíduos de lisina e arginina do terminal carboxi dos peptídeos. No entanto, não os cliva quando esses dois aminoácidos são seguidos por pralina. A atividade da tripsina é utilizada em diversos processos biotecnológicos, sendo a ação da tripsina conhecida como tripsinização ou proteólise de tripsina. A estrutura cristalina da tripsina é mostrada na figura 1.

Figura 1: Tripsina

O pH ideal para a ação da tripsina é 7,6-8,5. Geralmente, o vermelho de fenol é usado em ensaios de tripsina para monitorar a faixa de pH acima. O vermelho de fenol dá uma cor rosada nesta faixa de pH. Os ensaios de tripsina são realizados em gelo seco.

Como a tripsina funciona na cultura celular

As proteínas da membrana plasmática são responsáveis ​​por uma ampla variedade de funções essenciais para a manutenção da atividade fisiológica normal da célula. Algumas proteínas da membrana plasmática, como as famílias das caderinas, são proteínas adesivas que servem como âncoras, ligando as proteínas do citoesqueleto à matriz extracelular. Isso auxilia na adesão e migração celular. As proteínas adesivas dentro da membrana plasmática são mostradas na figura 2.

Figura 2: Proteínas adesivas celulares

Em culturas de células, a tripsina pode ser adicionada ao meio para liberar as células aderentes da superfície do recipiente de cultura por digestão das proteínas adesivas. A tripsina também libera células de agregados por meio da digestão de proteínas adesivas. O EDTA também é adicionado às culturas de células junto com a tripsina para quelar os íons divalentes no meio. Os íons cálcio e magnésio podem inibir a ação da tripsina. Em última análise, a tripsina ajuda a obter células individuais das culturas de células, facilitando o processamento posterior das células.

Conclusão

A tripsina é uma enzima fotolítica que digere peptídeos. A tripsina é amplamente usada em cultura de células para obter células individuais, pois a tripsina digere as proteínas adesivas e as libera no meio.

Referência:

1. “Alteração do Proteoma Induzida por Tripsina durante a Subcultura Celular em Células de Mamíferos.” Journal of Biomedical Science, BioMed Central, 11 de maio de 2010, disponível aqui.

Cortesia de imagem:

1. “1UTN” Pelo usuário: DrKjaergaard - Trabalho próprio: Do ​​arquivo PDB 1UTN. Criado com PyMol (Domínio Público) via Commons Wikimedia 2. “Adesão celular” por ZabMilenko na Wikipédia em inglês - Transferido de en.wikipedia para Commons por Premeditated Chaos usando CommonsHelper (Domínio Público) via Commons Wikimedia