o principal diferença entre Southern Northern blotting e Western blotting é que o Southern blotting envolve a identificação de DNA, e Northern blotting envolve a identificação de RNA, enquanto que Western blotting envolve a identificação de proteínas.

Southern, Northern e Western são três técnicas de blotting usadas para detectar um DNA, RNA ou molécula de proteína específica em uma amostra. Durante a transferência, as macromoléculas são transferidas do gel para uma membrana e feitas para se ligarem a um ácido nucleico ou anticorpo específico que ajuda na detecção.

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O que é Southern Blotting

Southern blotting é a técnica usada para detectar uma sequência específica de DNA em uma mistura de DNAs. As etapas básicas de um Southern blot são as seguintes.

Eletroforese - Separa a amostra de DNA em bandas distintas com base no tamanho por eletroforese em gel.

Transferir - Durante a transferência, uma membrana de nitrocelulose é colocada em contato com o gel e bandas de DNA movem-se para a membrana por ação capilar.

Detecção de sequências específicas - A sequência alvo na membrana é hibridizada com a sequência específica de oligonucleotídeos marcada, denominada sonda de hibridização. A sonda de hibridação é curta, com tamanho de 100-500 bp, molécula de DNA de fita simples. A estringência, que depende da temperatura e da concentração de sal do tampão de hibridização, afeta a hibridização. O alto rigor definido pela alta temperatura e baixa concentração de sal aumenta a especificidade da hibridização, enquanto o baixo rigor definido pela baixa temperatura e alta concentração de sal diminui a especificidade.

Figura 1: Southern Blotting

O objetivo principal do Southern blotting é detectar uma sequência específica de DNA em uma amostra. A técnica é usada em impressões digitais de DNA, testes de paternidade, identificação de vítimas e identificação de criminosos. Também auxilia na identificação de genes específicos, em RFLP (polimorfismo de fragmento de restrição), mutação e identificação de rearranjo gênico, doenças genéticas e agentes infecciosos.

O que é Northern Blotting

Northern blotting é a técnica usada para detectar um RNA específico em uma mistura de RNAs. As etapas básicas de um Northern Blot são as seguintes.

Eletroforese - Separa a amostra de RNA de acordo com o tamanho em bandas distintas.

Transferir - Por ação capilar, bandas de RNA no gel são transferidas para a membrana.

Detecção de sequências específicas - A sequência de RNA alvo é detectada por hibridização com uma sonda oligonucleotídica marcada feita de DNA.

Figura 2: Northern Blotting

Uma vez que o Northern blotting pode identificar uma sequência específica de RNA em uma amostra, ele pode ser usado em estudos de expressão gênica. Também pode ajudar no diagnóstico de doenças.

O que é Western Blotting

Western blot é uma técnica de blotting usada para detectar uma sequência de aminoácidos específica em uma mistura de proteínas. As etapas básicas de um Western Blot são as seguintes.

Eletroforese - Proteínas individuais são separadas com base no tamanho em bandas por SDS PAGE.

Transferir - Bandas de proteína no gel são transferidas para uma membrana por blotting.

Detecção de proteínas específicas - A membrana com proteínas separadas é incubada com um anticorpo primário que se liga apenas à proteína específica. Um anticorpo secundário, que é marcado com uma enzima, como peroxidase de rábano (HRP) ou fosfatase alcalina, é usado para detectar o anticorpo primário. Quando incubado com o substrato, a ação da enzima visualiza a ligação dos anticorpos a uma região específica da membrana.

Figura 3: Western Blotting

Western blotting também é chamado de proteína blot ou immunoblotting. Ele pode identificar o número de proteínas em uma amostra, a presença de bactérias e vírus no soro e a presença de anticorpos anti-HIV no soro. Ele também pode detectar proteínas defeituosas. Além disso, o western blotting é o teste definitivo para hepatite B, doença de Creutzfeldt-Jacob, doença de Lyme e Herpes.

Semelhanças entre Southern Northern e Western Blotting

Diferença entre Southern Northern e Western Blotting

Definição

Southern blotting refere-se a um procedimento para identificar sequências específicas de DNA, enquanto Northern blotting se refere a uma adaptação do procedimento de Southern blot usado para detectar sequências específicas de RNA por hibridização com DNA complementar e Western blotting se refere a um procedimento de blotting usado para identificar aminoácidos específicos - sequências de ácido em proteínas.

Desenvolvido por

Southern blotting foi desenvolvido por Edward M. Southern em 1975. Northern blotting foi desenvolvido por Alwine e seus colegas em 1979, e Western blotting foi desenvolvido pelo grupo de George Stark na Universidade de Stanford em 1979.

Molécula detectada

Southern blotting detecta sequências de DNA específicas, Northern blotting detecta sequências de RNA específicas, enquanto Western blotting detecta proteínas específicas.

Eletroforese em Gel

Southern blotting envolve eletroforese em gel de agarose, e Northern blotting envolve desnaturação de formaldeído gel de agarose, enquanto Western blotting envolve SDS PAGE.

Método de Blotting

Tanto o Southern quanto o Northern Blotting envolvem transferência capilar, enquanto o Western blotting envolve uma transferência elétrica.

Probes

Southern blotting usa sondas de DNA enquanto Northern blotting usa sondas de cDNA e Western blotting usa anticorpos primários e secundários.

Aplicativo

Southern blotting é usado para identificar sequências de genes específicos e em impressões digitais de DNA. Northern blotting é usado na análise de expressão gênica, e Western blotting é usado no diagnóstico de doenças.

Conclusão

Southern blotting identifica sequência específica de DNA, enquanto Northern blotting identifica sequência específica de RNA e Western blotting identifica sequência específica de proteína em uma amostra. Portanto, a principal diferença entre as três técnicas de blotting é o tipo de macromolécula que detectam.

Referência:

1. “Southern Blotting: Princípio, Procedimento e Aplicação -.” NOTAS DE BIOLOGIA ONLINE, 4 de dezembro de 2017, disponível aqui2. Kochunni, Deena T e Jazir Haneef. “Northern Blotting: Principle, Procedure and Applications.” Exames de biologia 4 U, disponíveis aqui3. “Técnica de Western Blotting: Princípio, Procedimento e Aplicação -.” BIOLOGY ONLINE NOTES, 4 de dezembro de 2017, disponível aqui

Cortesia de imagem:

1. “Figura 17 01 05” Por CNX OpenStax - (CC BY 4.0) via Commons Wikimedia2. “Northern blot diagram” Por Ilewieszoośmiornicach - Própria obra (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia 3. “Western Blotting” Por Cawang - Própria obra (CC0) via Commons Wikimedia