o principal diferença entre RAPD e RFLP é que RAPD é um tipo de PCR que amplifica fragmentos aleatórios de DNA em um grande molde usando primers curtos, ao passo que, no RFLP, uma ou mais enzimas de restrição digerem a amostra de DNA, produzindo fragmentos de restrição então separados por eletroforese em gel. Portanto, o RADP requer apenas uma pequena quantidade de DNA para o ensaio, enquanto o RFLP requer uma grande quantidade de DNA. Além disso, RAPD é um processo rápido, que pode detectar 1-10 loci, enquanto RFLP é um processo mais lento, que pode detectar apenas 1-3 loci. Além disso, o RAPD é incapaz de detectar variantes alélicas, enquanto o RFLP pode detectar variantes alélicas.

RAPD (DNA polimórfico amplificado aleatoriamente) e RFLP (polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição) são duas técnicas em biologia molecular para detectar marcadores genéticos, que são sequências curtas de DNA, explorando variações no DNA homólogo.

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O que é RAPD

RAPD ou DNA polimórfico amplificado aleatoriamente é um método rápido baseado em PCR para a detecção de variação de DNA. Dois laboratórios (Williams et. Al., 1990; Welsh e McClelland, 1990) desenvolveram a técnica de forma independente. Além disso, o RAPD usa um único primer arbitrário para a amplificação de muitos produtos de DNA discretos. As etapas envolvidas no RAPD são as seguintes:

1. Extração de DNA
2. Amplificação por primers aleatórios
3. Eletroforese em gel e visualização de marcadores

   

   Figura 1: Diversidade da alface por marcadores RAPD

Além disso, ao resolver os padrões resultantes, um perfil de DNA semi-único de uma amostra de DNA particular pode ser gerado. Devido à menor especificidade do primer aleatório usado no ensaio, comparativamente, um número maior de loci pode ser amplificado por primer aleatório. Porém, o RAPD é uma técnica importante para mapeamento de genes, genética de populações, genética evolutiva molecular, melhoramento animal e vegetal, etc. Além disso, é vital para iniciantes por meio da velocidade, custo, eficiência e também pelo número de marcadores gerados.

O que é RFLP

RFLP ou polimorfismo de comprimento de restrição é um método que explora a variação no DNA homólogo. É também um método conhecido por seu poder de discriminação. No entanto, como o RFLP é um método não baseado em PCR, ele usa enzimas de restrição para a geração de fragmentos do genoma. Além disso, o RFLP detecta as variações dos comprimentos dos fragmentos de restrição entre os indivíduos. As três etapas envolvidas no RFLP são as seguintes:

1. Restrição da digestão de DNA
2. Eletroforese em gel
3. Southern blotting por sondas específicas e detecção

   

   Figura 2: Detecção de variantes alélicas por RFLP

Semelhanças entre RAPD e RFLP

Diferença entre RAPD e RFLP

Definição

RAPD (DNA polimórfico amplificado aleatoriamente) se refere a uma técnica baseada em PCR para identificar a variação genética, enquanto RFLP (polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição) se refere a um método molecular de análise genética, que permite que os indivíduos sejam identificados com base em padrões únicos de corte de enzimas de restrição em regiões específicas do DNA.

Tipo de método

Método

Enquanto o RAPD envolve a amplificação de marcadores genéticos em um genoma usando primers aleatórios, o RFLP envolve a digestão de restrição do DNA genômico.

Quantidade de DNA

Além disso, o RAPD requer uma pequena quantidade de DNA (10-50 ng) para a análise, enquanto o RFLP requer comparativamente uma grande quantidade de DNA (2-10 μg).

Especificidade para Espécies

O RAPD usa primers aleatórios universais para qualquer espécie, enquanto o RFLP usa diferentes sondas específicas para cada espécie.

Eficiência

Além disso, o RAPD tem menos etapas e é um processo rápido, enquanto o RFLP tem mais etapas, pois é um processo lento.

Confiabilidade

RAPD é menos confiável, enquanto RFLP é mais confiável.

Capacidade de detecção

Outra diferença entre RAPD e RFLP é que RAPD pode detectar 1-10 loci, enquanto RFLP pode detectar apenas 1-3 loci.

Detecção de variantes alélicas

Além disso, o RAPD é incapaz de detectar variantes alélicas, enquanto o RFLP pode detectar variantes alélicas.

Importância

RAPD é uma técnica importante para mapeamento de genes, genética populacional, genética evolutiva molecular, melhoramento de animais e plantas, etc., enquanto RFLP é importante na genotipagem, análise forense, testes de paternidade, detecção de padrões em doenças hereditárias e na detecção de portadores de doenças.

Conclusão

RAPD é uma técnica baseada em PCR para detectar marcadores genéticos presentes em um genoma. Além disso, utiliza primers aleatórios para a amplificação desses marcadores. Como o RAPD é uma técnica baseada em PCR, requer apenas uma pequena quantidade de DNA. Além disso, é um método rápido, mas não consegue detectar variantes alélicas. Em contraste, RFLP é um método não baseado em PCR que detecta variação de DNA dentro de um genoma. No entanto, ele usa digestão de restrição de DNA, Southern blotting e detecção de sequências usando sondas específicas. Portanto, é um método mais confiável. Mas, requer uma grande quantidade de DNA. Portanto, a principal diferença entre RAPD e RFLP é o procedimento e a importância.

Referências:

1. “Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD).” National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine, disponível aqui.2. “Polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP).” National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine, disponível aqui.

Cortesia de imagem:

1. “RAPD” Por Llull ~ commonswiki assumido - Trabalho próprio assumido (Domínio Público) via Commons Wikimedia 2. “RFLP-figura” Por Kenneth.jh.han - Trabalho próprio (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia